萘夫西林鈉原料藥（批號：20080203、20080804，純度：90％）、注射用萘夫西林鈉（即萘夫西林鈉注射用無菌粉末，批號：20080401、20080903，規(guī)格：每瓶1.0g）均由華藥集團(tuán)山西博康藥業(yè)有限公司提供；萘夫西林鈉USP對照品（美國藥典會提供，批號：10G229，含量：90.1％）；萘夫西林鈉工作對照品（河北省藥品檢驗所標(biāo)定，批號：20081115，含量：90.0％）；醋酸鈉為分析純，乙腈為色譜純。

2方法與結(jié)果2.1溶液的制備2.1.1含量測定用溶液。取萘夫西林鈉原料藥或注射用無菌粉末適量，精密稱定，加水溶解并稀釋制成每1mL中含0.2mg的溶液，作為供試品溶液a；另取萘夫西林鈉工作對照品適量，同法制備，作為對照品溶液。

2.1.2有關(guān)物質(zhì)測定用溶液。取萘夫西林鈉原料藥或注射用無菌粉末適量，精密稱定，加水溶解并稀釋制成每1mL中含1.0mg的溶液，作為供試品溶液b；精密量取1mL，置于100mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。

2.2色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗色譜柱：PhenomenexGeminiC19（150mm×4.6mm，5μm）、依利特SinoChromC19（150mm×4.6mm，5μm）；流動相：0.05mol？L－1醋酸鈉溶液（用稀醋酸調(diào)節(jié)pH值至7.5）-乙腈（75∶25）；檢測波長：230nm；進(jìn)樣量：10μL.

取0.2mgmL－1的萘夫西林鈉對照品溶液進(jìn)樣測試，按萘夫西林峰計算理論板數(shù)為3400，拖尾因子為0.97.溶劑（水）、對照品溶液、由萘夫西林鈉原料藥制備成的供試品溶液a、b的色譜結(jié)果詳。

2.3線性關(guān)系考察精密稱取萘夫西林鈉工作對照品適量，用水溶解并稀釋制成含萘夫西林0.038、0.057、0.095、0.19、0.38、0.76、1.14mg？

mL－1的系列濃度溶液，分別取10μL進(jìn)樣測定，以峰面積（Y）對濃度（X）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算回歸方程和相關(guān)系數(shù)。結(jié)果，回歸方程：Y＝7.915×107X－6.291×103（r＝0.9999），萘夫西林檢測濃度線性范圍為0.04～1.14mgmL－1。

2.4專屬性考察對原料藥分別進(jìn)行酸、堿、熱、光、氧化破壞試驗，以獲得降解產(chǎn)物，考察其與主峰的分離情況，結(jié)果降解產(chǎn)物峰與主峰分離完全，雜質(zhì)峰之間亦有較好的分離。

2.5回收率試驗分別精密稱取注射用無菌粉末20、25、30mg各3份，置于250mL容量瓶中，精密加入等量的萘夫西林鈉工作對照品，加水溶解并稀釋至刻度，制成含量測定濃度80％、100％、120％的溶液，搖勻，進(jìn)樣測定。按外標(biāo)法以峰面積計算回收率?？梢姡练蛭髁值钠骄厥章蕿?9.5％，RSD＝0.60％（n＝9），表明方法準(zhǔn)確度良好。

2.6重復(fù)性試驗取同一批供試品，重復(fù)取樣6次，依法測定其含量，結(jié)果含量的RSD＝0.44％，表明方法重復(fù)性好。

2.7穩(wěn)定性試驗精密稱取萘夫西林鈉原料藥20mg，置于100mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，在室溫下放置0、2、4、6、8h后進(jìn)樣，測定峰面積；同時與以枸櫞酸溶液（pH7.0）為溶劑制備的樣品溶液對比。結(jié)果2種溶劑制備的樣品溶液8h峰面積的RSD分別為0.32％、0.13％，表明2種溶液均比較穩(wěn)定。

2.8檢測限測定取萘夫西林鈉工作對照品適量，用水溶解并稀釋制成系列濃度的溶液進(jìn)樣，記錄色譜圖。以信噪比S/N為3時，注入儀器的量確定萘夫西林的檢測限為2ng.

2.9重現(xiàn)性考察不同實驗室分別采用不同型號HPLC儀及不同廠牌色譜柱對樣品進(jìn)行測試，結(jié)果主峰與相鄰雜質(zhì)峰均分離完全，含量及有關(guān)物質(zhì)測定結(jié)果基本一致。

2.10樣品測定2.10.1主藥含量測定。取原料藥及注射用無菌粉末各2批，按“2.1.1”項下方法制備，取供試品溶液和對照品溶液各10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按外標(biāo)法計算含量，結(jié)果見。

2.10.2有關(guān)物質(zhì)測定。取原料藥及注射用無菌粉末制劑各2批，按“2.1.2”項下方法制備，取供試品溶液和對照溶液各10μL注入液相色譜儀，記錄色譜至主成分峰保留時間的4倍。

按不加校正因子的主成分自身對照法計算雜質(zhì)總和。

3討論本文參考USP30版中萘夫西林鈉原料藥及其注射用無菌粉末的含量測定方法，以0.05mol？L－1醋酸鈉溶液（用稀醋酸調(diào)節(jié)pH值為7.5）-乙腈為流動相，并對流動相比例、溶劑、檢測波長、測定濃度進(jìn)行了選擇。

3.1流動相比例的調(diào)整為保證主峰與可能產(chǎn)生的降解產(chǎn)物峰的分離以及雜質(zhì)峰之間的分離，將乙腈比例由30％降為25％，結(jié)果各物質(zhì)分離較好。

3.2溶劑的選擇USP30版采用枸櫞酸溶液（pH7.0）作為溶劑，本法擬用水作為溶劑。經(jīng)過對2種溶液的8h穩(wěn)定性進(jìn)行考察，結(jié)果表明二者均比較穩(wěn)定，故選用經(jīng)濟(jì)易得，溶解性、穩(wěn)定性均能滿足分析要求的水作為溶劑。

3.3檢測波長的選擇取萘夫西林鈉工作對照品，用水溶解并稀釋成適當(dāng)濃度，在200～350nm波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果萘夫西林鈉在227nm波長處有最大吸收，USP30版采用的檢測波長為254nm接近吸收谷，而筆者的研究發(fā)現(xiàn)萘夫西林鈉在227nm波長處的吸收系數(shù)較254nm波長處的吸收系數(shù)高10余倍；取熱、酸、堿、光、氧化破壞的樣品溶液分別進(jìn)樣，用二極管陣列檢測器（DAD）檢測主要有關(guān)物質(zhì)的光譜特征，結(jié)果主要降解產(chǎn)物分別在224～229nm波長處有最大吸收。因此在230nm波長處主藥及有關(guān)物質(zhì)均有較高檢測靈敏度，可作為含量及有關(guān)物質(zhì)的檢測波長。

3.4測定濃度的選擇根據(jù)色譜峰響應(yīng)的線性范圍以及為了微量雜質(zhì)的有效檢出，筆者擬定主藥含量和有關(guān)物質(zhì)的測定濃度分別為0.2、1.0mg？mL－1，進(jìn)樣量為10μL.

3.5記錄時間的選擇降解產(chǎn)物中強(qiáng)保留成分的出峰時間約為主峰保留時間的3.5倍，故確定有關(guān)物質(zhì)色譜記錄時間為主峰保留時間的4倍。